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        豬藍耳病免疫抗體監測問題探討

        時間:2009-11-11    點擊: 次    來源:陽光畜牧網    作者:金顏輝等 - 小 + 大

        金顏輝*1 黃盛興2 黃雁1
        (1 福建省動物疫病預防控制中心 350003;
        2 建甌市小松鎮畜牧獸醫站 353111)

                  摘要:一組實驗豬場應用PRRS滅活疫苗免疫豬場生豬,采集同一份豬血清ELISA試劑盒檢測,測不出免疫抗體(0∕14),金標檢出陽性率(9∕14)64.28%;另一組用進口減毒活苗免疫的同一份豬血清ELISA檢出陽性數百分百(16∕16),金標檢不出(0∕16)。另一實驗豬場滅活苗兩次免疫,金標檢出陽性率(16∕21)76.19%,ELISA檢不出;活疫苗兩次免疫, ELISA檢出陽性率(16∕21)76.19%,金標檢不出。結論不同疫苗免疫效果,用不同檢測方法,結果差異很大。
                 關鍵詞:豬藍耳病,抗體,監測

                 豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRSV引起的一種高度接觸性的傳染病,以引起母豬繁殖障礙、仔豬和育成豬呼吸道癥狀及高死亡率為主要特征。該病于1987年首次在北美發現[1],之后在世界范圍內迅速傳播,我國于1996年首次分離到該病毒[2],最近幾年PRRSV也已成為我國重要的豬傳染病病原之一。特別是2006年出現變異毒株后,對我國養豬業造成了更加嚴重的危害和經濟損失[3]。
          針對目前我國豬藍耳病疫苗免疫后抗體水平監測中存在的一些問題,我們應用豬藍耳病金標試紙條及進口ELISA試劑盒,對經豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(NVDC-JXA1株)和進口減毒活疫苗免疫后采集的豬血清進行比對實驗。
          免疫程序為: 18日齡分兩組免疫,滅活疫苗組免疫20天后采血清樣檢測,同一份血清檢測結果:滅活苗免疫組ELISA檢測血清抗體滴度檢不出(0∕14),金標檢出陽性率(9∕14)64.28%;進口減毒活疫苗用同樣免疫程序,采血清樣檢測ELISA檢出陽性率百分百(16∕16),金標檢不出。另一豬場實驗結果:免疫程序為 疫苗兩次免疫間隔兩周,二免后28天采血樣檢測,滅活疫苗免疫的ELISA檢不出(0∕21),金標檢出陽性率(16∕21)76.19%,活苗免疫的ELISA檢出陽性率(16∕21)76.19%,金標檢不出;金標檢測中的3份陰性ELISA檢測是陽性, ELISA檢測中的3份陰性金標檢測是陽性。
                1 材料與方法
                1.1 材料
                 選取兩處健康豬場,經豬藍耳病弱毒疫苗及滅活疫苗免疫后,采血,按常規方法分離血清,備檢。
                1.2 試劑盒
                豬藍耳病抗體檢測試劑盒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Antibody Test Kit)購自IDEXX公司;豬藍耳病金標試紙條來自本中心福建省科技廳(2007)重大科技項目專題二“福建省畜禽重大疫病診斷及防治技術研究”課題組提供。
                1.3 操作步驟
                1.3.1 ELISA試劑盒:按試劑盒說明書,應用豬藍耳病抗體檢測試劑盒對采集的豬血清進行抗體檢測,步驟如下:血清用樣品稀釋液進行40倍稀釋,濃縮洗液恢復到室溫后混勻并用去離子水做10倍稀釋。在試劑盒自帶96孔板的C1、D1、C2、D2中加入100ul未稀釋的陰性對照樣品,在A1、B1、A2、B2孔中加入100ul未稀釋的陽性對照樣品,被檢樣品各加兩孔,每孔100ul。室溫孵育30min,甩去液體,每孔用洗液300ul清洗3-5次。每孔加入100ul酶標抗體,室溫孵育30min。甩去液體,每孔用洗液300ul清洗3-5次。每孔加入100ul TMB底物溶液,室溫孵育15min。加入100ul終止液并讀取OD650nm。按試劑盒給定計算公式進行判定。

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